Anti Human Globulin Serum

Mục đích sử dụng:

Huyết thanh chẩn đoán Anti Human Globulin sử dụng cho xét nghiệm Coombs để phát hiện in- vitro của lớp phủ kháng thể ở hồng cầu người. Một phương pháp xét nghiệm huyết học nhằm phát hiện sự hiện diện của kháng thể hoặc bổ thể gắn trên bề mặt hồng cầu. Đây là một xét nghiệm quan trọng trong chẩn đoán các bệnh lý liên quan đến thiếu máu tan máu tự miễn, bệnh lý tan máu của thai nhi và trẻ sơ sinh, phản ứng truyền máu.

Huyết thanh chẩn đoán Spectrum Anti-Human Globulin sử dụng cho cả 02 phương pháp xét nghiệm Coombs trực tiếp và Coombs gián tiếp.

coombs-test

  • Xét nghiệm Coombs trực tiếp (Direct antiglobulin Test – DAT)
Dùng để phát hiện kháng thể miễn dịch (bao gồm các kháng thể hoặc thành phần bổ thể là globulin) đã cảm nhiễm trên bề mặt hồng cầu của người bệnh. Ứng dụng:
– Chẩn đoán thiếu máu tan máu tự miễn, bệnh hệ thống
– Phát hiện tan máu ở trẻ sơ sinh do bất đồng nhóm máu mẹ – con
– Đánh giá phản ứng tan máu do truyền máu không hoà hợp nhóm máu giữa người co và người nhận.
  • Xét nghiệm Coombs gián tiếp (Indirect antiglobulin Test – IAT)
Dùng để phát hiện kháng thể miễn dịch (bao gồm các kháng thể hoặc thành phần bổ thể là globulin) tự do trong huyết tương có khả năng gắn kết với kháng nguyên hồng cầu. Ứng dụng:
– Sàng lọc kháng thể bất đồng nhóm máu trong thai kỳ.
– Sàng lọc trước truyền máu để phát hiện kháng thể kháng hồng cầu bất thường ở người nhận.
– Định danh kháng thể bất thường
– Định nhóm kháng nguyên của các hệ nhóm máu hồng cầu.

Hướng dẫn sử dụng Anti Human Globulin (AHG) trong nghiệm pháp Coombs Test.

  1. Xét nghiệm Coombs trực tiếp – Phương pháp ống nghiệm

+ Chuẩn bị mẫu thử: 01 ống máu chống đông bằng EDTA của người bệnh 2ml

+ Các bước tiến hành:

Bước 1: Nhỏ 0,5 ml hồng cầu khối của người bệnh vào ống nghiệm sạch. Rửa 4 lần bằng nước muối sinh lý (85% NaCl pH 7.0)

Bước 2: Chuẩn bị huyền phù hồng cầu 5%( 1 giọt hồng cầu khối của người bệnh + 19 giọt nước muối 0,85%, trộn đều). Kiểm tra hồng cầu xem có hiện tượng ngưng kết không?

Bước 3: Nhỏ 1 giọt hồng cầu 5% của người bệnh đã ghi nhãn ở trên. Sau đó thêm 2 giọt huyết thanh Coombs vào ống, trộn đều

Bước 4: Mang ống nghiệm đi li tâm 1000 vòng trong 20 giây.

Bước 5: Với những ống nghiệm cho kết quả âm tính nhỏ 1 giọt hồng cầu chứng, ly tâm 1000 vòng/phút x 15-30 giây. Đọc và ghi kết quả vào phiếu xét nghiệm phản ứng phải cho kết quả ngưng kết từ 2+ đến 3+. Nếu những ống nghiệm nào sau khi nhỏ hồng cầu chứng mà không ngưng kết thì lạp lại xét nghiệm từ đầu.

+ Nhận định kết quả:

Nghiệm pháp Coombs trực tiếp âm tính: Không có kháng thể miễn dịch, tự miễn trên bề mặt hồng cầu

Nghiệm pháp Coombs trực tiếp dương tính: Có kháng thể miễn dịch, tự miễn trên bề mặt hồng cầu.

2. Xét nghiệm Coombs gián tiếp – Phương pháp ống nghiệm

+ Chuẩn bị mẫu thử:

  • 01 ống máu chống đông bằng EDTA của người bệnh: 2ml
  • 01 ống máu không chống đông: 5ml

+ Các bước tiến hành:

Bước 1: Chuẩn bị ống nghiệm sạch khô, ghi nhãn và họ tên bệnh nhân hoặc mã số người bệnh

Bước 2: Chuẩn bị dung dịch hồng cầu nhóm O, 3%(nhỏ 1 giọt hồng cầu khối nhóm O + 29 giọt nước muối sinh lý 0,85% vào ống nghiệm, trộn đều)

Bước 3: Nhỏ 3 giọt huyết thanh của người bệnh vào ống nghiệm đã được ghi nhãn ở bước 1

Bước 4: Thêm 1 giọt hồng cầu nhóm O, 3% vào ống nghiệm trên rồi trộn đều

Bước 5: Thêm 3 giọt đệm LISS vào, trộn đều

Bước 6: Ủ ống nghiệm ở 37º C, 15 phút

Bước 7: Sau khi ủ xong, quan sát hiện tượng tan máu và ngưng kết. Nếu có ghi kết quả là DƯƠNG TÍNH

Bước 8: Nếu không có hiện tượng tan máu và ngưng kết, rửa hồng cầu 4 lần bằng nước muối sinh lý 0,85%

Bước 9: Thêm 2 giọt thuốc thử Anti Human Globulin vào ống nghiệm trên trộn đều. Đem đi ly tâm 1000 vòng trong 20 giây.

Bước 10: Với những ống nghiệm cho kết quả âm tính, nhỏ thêm 1 giọt hồng cầu chứng, trộn đều ly tâm 1000 vòng trong 20 giây. Đọc và ghi lại kết quả vào phiếu xét nghiệm, phản ứng phải cho kết quả ngưng kết từ 2+ đến 3+. Nếu những ống nghiệm nào sau khi nhỏ hồng cầu chứng mà không ngưng kết thì lạp lại xét nghiệm từ đầu.

+ Nhận định kết quả: 

Nghiệm pháp Coombs gián tiếp âm tính: Không có kháng thể miễn dịch trong huyết thanh của người bệnh và người hiến máu, trên hồng cầu không có kháng nguyên tương ứng với kháng thể nhóm máu được xác định.

Nghiệm pháp Coombs gián tiếp dương tính: Có kháng thể miễn dịch trong huyết thanh của người bệnh và người hiến máu, trên hồng cầu có kháng nguyên tương ứng với kháng thể nhóm máu được xác định.